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怎樣治理實(shí)驗(yàn)室的DNA氣溶膠污染

更新時(shí)間:2020-07-14  |  點(diǎn)擊率:906

存在于實(shí)驗(yàn)室桌面、儀器、耗材以及空氣中的DNA污染,對(duì)于實(shí)驗(yàn)會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的干擾,尤其是氣溶膠攜帶的DNA分子(一個(gè)氣溶膠能攜帶上萬(wàn)個(gè)DNA),因在空氣中漂浮,難以消除。那么我們可以采取什么方法,來(lái)解決這一問(wèn)題呢?

 

  1、氣溶膠很容易在移液器加樣的時(shí)候產(chǎn)生,因此是不可避免的。它會(huì)很快地發(fā)生沉降。因此,經(jīng)常使用專門的DNA污染清除劑,如德國(guó)Minerva公司的PCR Clean噴霧劑和濕巾產(chǎn)品,對(duì)阻止DNA污染的擴(kuò)散,無(wú)疑是一個(gè)不錯(cuò)的選擇。

 

  2、直接針對(duì)氣溶膠的,就目前所知,只有空氣過(guò)濾系統(tǒng)。氣溶膠可以被過(guò)濾材料所吸附。因此,任何使形成氣溶膠的危險(xiǎn)性上升的操作都必須在生物安全柜或通風(fēng)柜里進(jìn)行,或者是開通實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)。如果不具備以上條件的,也應(yīng)多注意房間通風(fēng)。

 

  3、PCR實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部區(qū)域進(jìn)行區(qū)隔。PCR實(shí)驗(yàn)室原則上分為四個(gè)區(qū)域,即試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū),前兩區(qū)為擴(kuò)增前區(qū),后兩區(qū)為擴(kuò)增后區(qū)。擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開。實(shí)驗(yàn)材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等,只能從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū),即從試劑準(zhǔn)備區(qū)→樣品處理區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū),不得逆向流動(dòng)。實(shí)驗(yàn)室的氣流也應(yīng)從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū),不得逆向流動(dòng)。

 

  4、建議逐漸用熒光定量PCR取代常規(guī)PCR,因?yàn)闊晒舛縋CR能顯著減少了實(shí)驗(yàn)室PCR產(chǎn)物污染的可能性。PCR產(chǎn)物是轉(zhuǎn)基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室主要的污染來(lái)源之一,而熒光定量PCR不需要電泳,因此反應(yīng)結(jié)束后不需要開蓋,避免了反應(yīng)產(chǎn)物泄漏造成的污染。而進(jìn)行凝膠電泳增加了檢測(cè)步驟,易產(chǎn)生氣溶膠污染。建議推進(jìn)定量PCR的應(yīng)用,并逐步替代定性PCR。

 

  5、值得注意的是,要祛除DNA污染而不是僅僅滅菌的話,常規(guī)紫外線照射建議應(yīng)延長(zhǎng)至2小時(shí),即使這樣,紫外照射對(duì)祛除小片段(200bp以下)的DNA污染效果仍然不佳(參考文獻(xiàn):UV irradiation and autoclave treatment for elimination of contaminating DNA from laboratory consumables. 《Forensic Science International Genetics》, 2010,4(2) :89)。這時(shí)還應(yīng)考慮其他的方法。

 

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